Nükleik Asit Elektroforez Süresi 10 Dakikaya Nasıl Düşürülür?

Nükleik Asit Elektroforezi genellikle olması gerekenden daha yavaştır - zaman çalar, jelleri aşırı ısıtır ve yoğun laboratuvarlarda kararları geciktirir.

Acı: Jeller Neden Çok Uzun Sürüyor?

Çoğu takım 30 – 60 dakikalık koşuları "normal" olarak kabul eder. Ancak uzun tirajlar gerçek maliyetleri gizler. Isı birikir, bantlar bulanıklaşır ve PCR ile bir sonraki adım arasında zaman kaybedersiniz. Klasik TAE/TBE tamponları, daha yüksek alan kuvvetlerinde hız için tasarlanmamıştır. Voltajı itin ve jel ısınır; daha uzun süre iterseniz, bozuk geçiş veya zayıf kurtarma riskiyle karşı karşıya kalırsınız. Bulaşmayı düzeltmek için bir jeli yeniden çalıştırmak dakikalardan daha pahalıya mal olur - güveni azaltır ve iş akışınızı tıkar.

Müşterilerle yaptığımız görüşmelerde aynı sıkıntılı noktaları tekrar tekrar duyuyoruz. Araştırmacılar, PCR ürünlerinin daha hızlı kontrol edilmesini, durmayan yüksek verimli ekranlar ve doğrudan ligasyona veya jel geri kazanımına gidebilen temiz bantlar istiyor. Tedarik, uzun ömürlü ve sürekli değiştirme gerektirmeyen sarf malzemeleri ister. Longlight Technology'de basit bir soru sorduk: Nükleik Asit Elektroforezi, aşağı akış performansından ödün vermeden 5 – 10 dakika içinde güvenilir bir şekilde tamamlanabilseydi ne olurdu?

❓ Laboratuvarlar Bize Ne Söylüyor?

Aşırı ısınma, atış ve çalıştırma arasındaki tutarsız tampon gücü ve aşağı akış adımlarıyla ilgili endişe, hızı sınırlar. Takımlar, ligasyon, ekstraksiyon verimi veya RNA stabilitesi konusunda endişe duydukları için tamponları değiştirmekte tereddüt ederler. Hız ve kalite arasında seçim yapmak zorunda kalmamalısınız.

(Şekil1. %0,8 agaroz jel üzerine süper hızlı çalışan tampon uygulaması. Şerit 1: D12000

merdiven (5 μL); Şerit 2: 4 μL; Şerit 3: 3 μL; Şerit 4: 2 μL; Şerit 5: 1 μL)

(Şekil 2. Süper Hızlı Çalışan Arabelleğin Uygulanması

%1 Agaroz Jel. Şerit 1: D5000 merdiven (5 μL); Şerit 2: 4 μL; Şerit 3: 3 μL; Şerit 4: 2 μL; Şerit 5: 1 μL)

(Şekil 3. Süper Hızlı Çalışan Arabelleğin Uygulanması

%2 Agaroz Jel. Şerit 1: D1000 merdiveni (5 μL); Şerit 2: 4 μL; Şerit 3: 3 μL; Şerit 4: 2 μL; Şerit 5: 1 μL.)

• Süper Hızlı Çalışan Tampon, Şekilde gösterildiği gibi çeşitli agaroz jel konsantrasyonlarıyla (%0,8, %1, %2) tamamen uyumludur 1–3. Jel konsantrasyonundan bağımsız olarak, nükleik asit bantları mükemmel çözünürlük ve berraklığı koruyarak farklı boyutlardaki DNA moleküllerini ayırmaya yönelik deneysel ihtiyaçları sağlar.

Düzeltme: Süper Hızlı Çalışan Arabellek Açıklaması

Bizim 50x Süper Hızlı Çalışan Tampon agaroz Nükleik Asit Elektroforezi için özel olarak üretilmiş düşük iyon mukavemetli bir formülasyondur. Daha az iyonik yük, belirli bir alanda daha az ısı anlamına gelir. Doğru agaroz konsantrasyonuyla eşleştirdiğinizde, genellikle 30 dakika süren bir çalışmayı yalnızca 5 – 10 dakikaya sıkıştırarak 25 – 30 V/cm'ye kadar güvenle çalışabilirsiniz. Bire bir kullanımda, ekipler genellikle standart 1x TAE veya 1x TBE'den ~2,5 – 3 kat daha hızlı ayrımlar görür.

Nasıl çalışır

Daha düşük iyon gücü, Joule ısınmasını azaltır ve daha yüksek voltajda keskin bantların korunmasına yardımcı olur. Bu termal kararlılık, hızı mümkün kılarken DNA ve RNA için çözünürlüğü korur. Aynı derecede önemli olan, kimyanın aşağı akış dostu olmasıdır: DNA jel ekstraksiyonuna veya ligasyonuna müdahale etmez, böylece doğrudan klonlamaya, temizlemeye veya nicelemeye geçebilirsiniz.

• Hızlı Geri Dönüş: 25 – 30 V/cm'de 5 – 10 dakikalık çalışmalar

• Keskin Bantlar: Yüksek alan güçlerinde bile yüksek çözünürlük

• Aşağı Akış Uyumluluğu: Jel geri kazanımı veya ligasyonu üzerinde etkisi yoktur

• Daha Yüksek Kurtarma: Sıklıkla TAE/TBE kurtarma performansını aşar

• Yeniden Kullanılabilir Tampon Kapasitesi: Çoklu kullanımlar için güçlü tamponlama

• Hızlı ayar

1x çalışma solüsyonu hazırlamak için tamponu 1:50 oranında seyreltin (örneğin, 20 mL 50x 980 mL damıtılmış suya). 1x'i oda sıcaklığında saklayın. En iyi tutarlılık için, jeli dökmek ve çalıştırmak için aynı 1x partisini kullanın; Farklı partilerin karıştırılması, jel arayüzündeki tampon gücünü değiştirebilir. 1x'in altında seyreltmeyin - bu anormal göçe davetiye çıkarır.

Çalışma Koşulları

25 – 30 V/cm jel uzunluğunda çalıştırın ve tank geometrinize ve termal davranışınıza göre ayarlayın. Herhangi bir yüksek alan koşusunda olduğu gibi, güç kaynağı sınırlarınızı onaylayın; Akım veya voltaj düşerse, cihazın akımı veya gücü kapatıp kapatmadığını kontrol edin. Boyama esnektir: jele boya ekleyin veya çalıştırdıktan sonra lekeleyin - her ikisi de işe yarar.

• Güvenlik ve İstikrar

Sürekli çalışmalar veya yüksek ortam sıcaklıkları tampon sıcaklığını yükseltebilir. Gerekirse, çözünürlüğü korumak için üniteyi soğutun veya buzun üzerine koyun. Doğruluğu korumak için arabelleği düzenli aralıklarla değiştirin. Hem 50x stok hem de 1x çalışma solüsyonunu oda sıcaklığında saklayın; Önerilen koşullar altında, stabilite alındıktan sonra en az 12 aydır. Her zaman olduğu gibi laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldiven giyin. Bu ürün, profesyoneller tarafından araştırma amaçlı kullanım için tasarlanmıştır.

Gerçek Dünya Kazanımları ve Nasıl Başlanır?

Hız güvenilir olduğunda, aşağı yöndeki her şey iyileşir. 5 – 10 dakikalık bir jel, günü raydan çıkarmadan PCR'yi kontrol etmenize, bir kitaplık hazırlığını ayarlamanıza veya bir ligasyonu doğrulamanıza olanak tanır. Yüksek verimli gruplar için daha hızlı jeller kuyrukları açar ve verimi artırır. Bu, öğle yemeğinden önce daha fazla veri ve daha az akşam tekrarı anlamına gelir.

Longlight Technology'de bu tamponu, ekiplerin hipotez ve sonuç arasındaki döngüyü kısaltmasına yardımcı olmak için oluşturduk. Pilot dağıtımlarda laboratuvarlar, eski tamponlarla karşılaştırıldığında daha yüksek alanlarda daha temiz bantlar, ligasyona daha yumuşak geçişler ve daha iyi jel ekstraksiyon verimi bildirdi. Yeniden kullanılabilirlik ve konsantre 50x formatı aynı zamanda maliyet kontrolünü de destekler: Bir şişe uzun bir yol kat eder ve güçlü tampon kapasitesi, çalışmanın ortasında daha az takas anlamına gelir.

Hızlı Nükleik Asit Elektroforezi İçin En İyi Uygulamalar

• Tutarlılık için aynı 1x partiyle yayınlayın ve çalıştırın.

• 25 V/cm'den başlayın, ardından kurulumunuzun izin verdiği ölçüde 30 V/cm'ye doğru ilerleyin.

• Daha uzun çalışma dizilerinde tampon sıcaklığını izleyin; gerektiği kadar soğutun.

• Hızlı tampona bir TAE/TBE döküm jeli düşürürseniz voltajı 200 V'un altında tutun; Çok yüksek voltajlar bu senaryoda sonuçları bozabilir.

• Parladığı Yer

Kısa doğrulama çalışmaları, klonlama sırasında hızlı kontroller, düzinelerce PCR amplikonunun taranması ve tipik olarak geleneksel sistemler altında gezinen RNA iş akışlarının hızlandırılması. Ekibiniz sonuçlara göre hareket etmek yerine jelleri beklemek için daha fazla zaman harcarsa, kazanç anında olur.

Fina Düşünceleri

Nükleik Asit Elektroforezi sürenizi netlikten veya iyileşmeden ödün vermeden 10 dakikaya indirmeye hazır mısınız? Numune istemek, SOP şablonu almak veya jel kutunuzun uyumluluğunu incelemek için bugün Longlight Technology ile konuşun. Jel çalışmalarını darboğazlardan hızlı bir kontrol noktasına dönüştürelim ve deneylerinizin devam etmesini sağlayalım.