Hızlı Elektroforez Tamponu: Jeli bir Kontrol Noktası Yapın, Bekleme Aşaması Değil

Agaroz jeli Elektroforezi deneyin sonu değil.

Daha sık ortada olur.

PCR yapar, jel koyar ve PCR ürününün saflaştırılıp yapılmadığını belirlersiniz. Bir plazmid sindirirsiniz, bantlara bakırsınız ve sonra devam edip etmemeye karar verirsiniz. Dizileme için örnekleri hazırlayırsınız, başka bir kalite kontrol jeli çalıştırırsınız ve ne yapacağınıza karar verirsiniz.

Bu yüzden elektroforez için oturup beklemek çok uzun bir süre gibi görünebilir. Bantları görene kadar hiçbir şey aşağı akıntıya doğru hareket etmez, ancak jel sadece yarım saat sürebilir.

Bu nedenle, hızlı elektroforez tamponunun en büyük avantajı, sadece DNA göçünü hızlandırmak için değil, bu karar döngüsünü kısaltmaktır.

Longlight's 50X Süper Hızlı Çalışan Arabellek hızlı DNA ayrımı sağlayan düşük iyon dayanıklılığına sahip bir agaroz elektroforez tamponudur. Genellikle önerilen koşullarda 30 dakika yerine tipik ayrılmaları 5-10 dakikada gerçekleştirebilir.

Bantlar konusunda emin değilseniz, beş dakikalık bir jel buna değmez.

Sadece hız istenen bir çıktı değildir.

Eğer jel sonuç almazsa, bu beş dakikalık tekrar eden jel olur ve artık beş dakikalık bir deney değildir.

Yaygın moleküler biyoloji uygulamaları için bile, bir sonraki kararı vermek için bantları ayırt etmek gerekir: Beklenen ürün PCR'de mi üretildi? Insert var mı? DNA kurtarılması için uygun mular? Numuneyle başka bir şey yapman gerekiyor mu?

Longlight'a göre, hızlı çalışan tampon, %0,8, %1 ve %2 agaroz konsantrasyonlarıyla uyumludur ve bu jellerde nükleik asit bantlarının net ayrımı sağlanmıştır.

Bu nedenle, doğru hedef maksimum göç hızı değildir.

Karar vermek için yeterli olan minimum koşu.

Faydalı olan voltaj penceresi, düşük iyon şiddeti değişiklikleriyle değişir.

Geleneksel bir jeli daha hızlı yapmak için voltajı artırmanın bir sınırı olduğunu görmek kolay: ısı.

Göç ve bant şeklinin öngörülebilirliği, artan akım ve termal yükle birlikte bozulabilir. Hızlı çalışan bir tampon ise sorunu farklı bir açıdan ele alır; iyon gücünü azaltır, böylece ısı oluşumunu azaltır ve ayrışma sırasında daha yüksek bir elektrik alanı kullanılabilmesini sağlar. Longlight'a göre, 1X çalışma tamponunun jel uzunluğu, elektroforez tankının geometrisine ve çevre sıcaklığına bağlı olarak yaklaşık 25–30 V/cm'dir.

Bu ayrım önemlidir.

"Hızlı elektroforez" demek, bir şeyler ters gitmene kadar daha yüksek voltaj kullanımını ifade etmez.

Bu, birlikte çalışacak şekilde tasarlanmış bir tampon ve çalışma penceresinin kullanılmasını ima etmelidir.

1X Buffer, Yöntemin bir parçası olarak kabul edilir.

Konsantre bir stok basit bir kavram gibi görünüyor: seyreltir ve koş.

Burada küçük laboratuvar kestirmeleri de gereksiz varyasyonlar getirebilir.

Longlight tarafından sağlanan hızlı tampon, 1X çalışan çözeltiyi oluşturmak için damıtılmış suda 1:50 oranında seyreltilen 50X konsantre olarak sağlanır. Şirket, jel ile tank arasında farklı tampon koşullarının yapılmasını önermemekte ve hem jel dökümü hem de elektroforez için aynı parti 1X çözeltisi kullanılması önerilir. 1X altında seyreltme de önerilmez çünkü anormal göç olabilir.

Hızlı bir jel işlemi başarılı olduktan sonra, SOP'ye ekleyin.

Bunu "laboratuvardaki herkesin" "kabaca bildiği" bir şey olarak bırakmaktan kaçının.

Başkasının tankından voltajı kopyalamayın!

Jel uzunluğu olmadan, voltaj değeri eksik bilgi olur.

Koşuyu alan gücü açısından düşünmek faydalıdır, çünkü mesafe ile zaman oranı, kompakt elektroforez odası ile uzun bir jel için aynı değildir.

Bu yüzden Longlight, jelin bir santimimetresi başına çalışma alanını belirledi. Ayrıca kısa, uzun, geniş ve daha büyük jeller gibi çeşitli tepsileri de barındırabilir; bu yüzden ezberlenen bir voltaj bir kurulumdan diğerine kolayca aktarılmamalıdır. HE-50 Yatay Jel Sistemi.

"Alan gücü" doğrulanmış bir "alan gücü" ile başlayın ve "gerçek jel"i gözlemleyin.

Sıcaklık, tank tasarımı ve güç kaynağı sınırları hâlâ bir deney.

Karar Kolayken Hızlı Elektroforez

Tüm jellerin aynı görevi yoktur.

Araştırmacılar bazen ayrıntılı analitik ayrım gerektirir. Bir diğer çalışma ise yaklaşık doğru boyutta PCR ürünü elde edilip elde edilmediğini kontrol etmek.

İkincisi ise, hızlı elektroforez kavramının özellikle faydalı olduğu bir durumdur.

PCR doğrulama, klon taraması, kısıtlama kontrolleri ve ara DNA QC ile bir iş günü boyunca birçok küçük aksaklık ortaya çıkabilir. Bu kontrol noktaları daha kısa olabilir, bu da araştırmacıların tekrarlanan geleneksel koşuları beklemek yerine bir öğleden sonra içinde birçok deneysel karar alabileceği anlamına gelir.

Bu rutin kontroller, Longlight'ın işaretleyicileri yükleme tamponu ile birlikte sağlanmış ve doğrudan agaroz elektroforezinde kullanılmak üzere tasarlanmış olduğundan, kullanıma hazır bir DNA Marker kullanılarak daha da basitleştirilebilir.

Amaç, her elektroforez deneyini standartlaştırmak değildir.

Hangi jellerin gerçekten hızlı bir soruya cevap vermek için tasarlandığını anlamak önemlidir.

Zaman tasarrufu süreci, bir sonraki adım hazır olana kadar devam etmez.

8 dakika elektroforez yaptığını ve ardından sonraki adımda tüm malzemeleri 20 dakika daha hazırlayacağımı hayal et.

Tampon hızlıydı. İş akışı ise değildi.

Çevredeki adımlar dikkate alındığında, hızlı elektroforez en iyi yöntemdir. Longlight'a göre, Süper Hızlı Çalışan Tampon, sonraki akışlara müdahale etmez; Longlight tamponunda ele geçirilen DNA üzerinde DNA jel çıkarımı ve ligasyonu yapılabilir.

Eğer jel hazırlama süresi laboratuvar için bir kısıtlamaysa, başka bir seçenek de kullanmaktır Agaroz Prekast Jeller, bu ürünler zaten yüklemeye hazırlanmış ve geleneksel jel hazırlama süresine tabi değildir.

İşte burada birkaç küçük zaman tasarrufu, bench çalışmalarında gerçek zaman tasarrufu haline gelir.

Görüntüleme, Jel Hızlı Olurr

Bir laboratuvar sürecinde bir adım hızlandırıldığında, tanıdık bir şey olur.

Birdenbire bir sonraki filmin ne kadar uzun olduğunu fark ediyorsun.

Ayırma birkaç dakika içinde tamamlandığında, jelin çıkarılması, aydınlatma kurulumu, pozlama ayarlanması, merdivenin belirlenmesi ve görüntülerin kaydedilmesi için toplam teslim süresinin daha büyük bir yüzdesi olabilir.

Yerleşik görüntü işleme ve otomatik işaretleyici notasyonu ile Longlight'ın GI-200 Jel Görüntüleme Sistemi elektroforez çalışması zamanı dışında uygulama arayan laboratuvarlar için geçerlidir.

Bu nedenle, hızlı bir tamponun ayrı değerlendirilmemesi önemlidir.

Bir örnek tanıtmaktan bir deney hakkında bir sonraki kararı verebileceğiniz zamana kadar iş akışının süresini ölçün.

Suyun yeniden kullanımının güvenli olduğuna dair kanıtlar sunun. Suyun yeniden kullanımının güvenli olduğuna dair kanıt sunun.

Longlight, tamponun birden fazla kez kullanılabilecek kadar tamponlaması olduğunu, ancak sonsuz sayıda kullanmadığını belirtir.

Çalışma ortamı, arka arkaya elektroforez, sıcak oda koşulları ve birikmiş kullanımla değişebilir. Bu nedenle, üreticinin talimatlarına göre, tekrarlanabilirliği sağlamak için çalışan tampon zaman zaman değiştirilmelidir.

Şimdi kolay bir laboratuvar kuralı için zaman.

Tamponun ne zaman değiştirilmesi gerektiğini belirleyin, "garip görünümlü bir jel" size değiştirme zamanının geldiğini hatırlatana kadar beklemeyin.

Son Sıra Kontrolü

Rutin laboratuvar kullanımında hızlı elektroforez tamponu kullanmayı düşünürken, laboratuvarın işlediği örneklerle tamponu doğrulamayı mutlaka yapın.

Uygun 1X çözümü oluştur. Döküm ve koşu aynı çalışma tamponu içinde yapılmalı. Jelin uzunluğuna ve tank koşullarına göre alan gücünü seçin. Sıcaklığa dikkat et. Üretilen bantların karar verilmesi için yeterli olduğundan emin olun.

Sonra elektroforez süresi dışında, faydalı bir şeyi ölçün:

Örnek yüklemek ve sıradaki adımı belirlemek için mi?

İşte burada Rapid Electrophoresis laboratuvarda rol oynar.

SSS

S1. Hızlı elektroforez tamponu ne anlama gelir? 'Hızlı elektroforez tamponu' terimi nedir?

Agaroz jellerinde nükleik asitlerin daha hızlı ayrılmasını sağlamak için tasarlanmış çalıştırma tamponu çalışması. Longlight'ın versiyonu, düşük iyon gücüne sahip olup daha yüksek alan güçleri ve daha düşük ısı üretimi sağlar.

S2. Hızlı elektroforez ne kadar hızlı olabilir? Hızlı elektroforez ise ne kadar hızlı olabilir?

Longlight genellikle önerilen koşullarda yaklaşık 5 - 10 dakika arası ayrılma sürelerine ulaşırken, geleneksel ayrılma koşularında yaklaşık 30 dakika sürer. Gerçek performans, jel uzunluğuna, tank tasarımına ve çalışma koşullarına bağlı olacaktır.

S3. 50X için çalışan buffer konsantrasyonu nedir?

Konsantre 1:50 nisbətinde damıtılmış suyla seyreltilerek 1X çalışan bir çözelti oluşturulur. Tercihen aynı parti 1X jeli yapmak ve akan odayı doldurmak için kullanılmalıdır.

S4. Jel ekstraksiyonundan önce daha yüksek hızda çalışan tampon kullanmaya gerek var mı?

Longlight'a göre, Süper Hızlı Çalan Tampon, DNA jel çıkarımı ve ligasyonu için kullanılabilir, böylece örneklerin standart aşağı akış uygulamalarında kullanılmasını sağlar.

S5. Hızlı elektroforez tamponu yeniden kullanılabilir mi?

Ürünün yeniden kullanım için tamponlama kapasitesi vardır, ancak ürünün doğruluk ve tekrarlanabilirliği için periyodik olarak değiştirilmesi önerilir. Sıcaklık ve tekrarlanan çalışma koşulları da izlenmelidir.